Аналізи на токсоплазмоз (Toxoplasma gondii): як здавати, що означають IgG, IgM, розшифровка результатів

Токсоплазмоз – це захворювання, що відноситься до паразитозів. Його збудник – внутрішньоклітинний найпростіший паразит Toxoplasma gondii. Детальніше про токсоплазми Гонда, її життєвому циклі і вплив на здоров’я людини ми писали в статті “Загальна інформація про токсоплазмозі: життєвий цикл токсоплазми, фактори і шляхи передачі інфекції, клінічні прояви, лікування”. Нижче докладно розглянемо методи діагностики цього захворювання.

1. Лабораторна діагностика

  1. 1Общее аналіз крові недостатньо інформативний для токсоплазмозу, тому може використовуватися тільки в комплексі з іншими методами діагностики. Можуть спостерігатися такі зміни: зниження числа лейкоцитів (лейкопенія), зменшення числа нейтрофілів (нейтропенія), відносне збільшення кількості лімфоцитів (лімфоцитоз), підвищення рівня еозинофілів (еозинофілія), помірна анемія.
  2. 2Паразітологіческій метод. Він полягає у виявленні збудника при дослідженні за допомогою мікроскопа різних середовищ. Ними можуть бути пофарбовані мазки крові, вміст лімфатичних вузлів, отримане шляхом їх пункції, спинномозкова рідина, що пройшла центрифугування, плацентарна тканина, а також препарати трупних матеріалів.
  3. 3Серологіческіе методи – шляхом пошуку специфічних антигенів або антитіл в сироватці крові досліджуваного. Вони засновані на реакціях імунітету. При попаданні антигенів (чужорідних речовин) збудника токсоплазмозу в організм людини, спеціальними клітинами імунної системи починають вироблятися антитіла, здатні специфічно зв’язувати відповідні їм антигени. При оцінці результатів серологічних методів діагностики важливо взяти до уваги те, що антитіла на антигени паразита в організмі людини виробляються через деякий час (1-4 тижні). Тому необхідно аналізувати результати досліджень в динаміці, як мінімум двічі. Саме про серологіі зазвичай говорять як про аналіз на токсоплазмоз.

1.1. Реакція зв’язування комплементу (РСК) з токсоплазменним антигеном

Дана реакція складається з двох фаз. Перша – інкубаційна. Тут змішують сироватку крові досліджуваного, антиген і комплемент (білковий комплекс). У другій фазі (індикаторної) в отриману суміш додають еритроцити барана і гемолітична сироватку, в якій містяться антитіла до них. Таким чином, відбувається виявлення вільного комплементу в первісної суміші. Можливі 2 варіанти результатів.

У разі наявності антитіл (тобто кров взята у хворого токсоплазмозом) утворюється імунний комплекс «антиген-антитіло», який фіксує комплемент, і в подальшому гемоліз (руйнування еритроцитів) не відбувається. Така реакція називається позитивною.

Якщо використовувалася сироватка крові здорової людини, то імунний комплекс не утворюється, комплемент не зв’язується і в другу фазу утворює з’єднання з комплексом, що складається з еритроцита барана і антиеритроцитарних антитіла. Відбувається гемоліз, і така реакція буде вважатися негативною.

Позитивний результат РСК спостерігається з другого тижня після інфікування, а максимальних значень досягає до двох-чотирьох місяців. Через два – три роки вираженість імунної відповіді знижується.

1.2. Метод непрямої імунофлюоресценції (РНІФ)

Цей метод полягає у виявленні антигену в досліджуваному препараті. Для цього на сироватку крові людини наносять діагностичну кролячу сироватку, що містить антитіла. У разі присутності антигену утворюється імунний комплекс, а Незв’язана антитіла відмивають.

Утворився комплекс візуалізується за допомогою антіглобуліновой (до кролячим імуноглобулінів) сироватки, міченої флюорохромом. Такий комплекс буде спостерігатися в спеціальному люмінесцентному мікроскопі.

Ніф буде позитивною вже через тиждень після початку захворювання і до другого – четвертого місяця досягає максимуму своїх значень. Низькі титри за результатами цієї реакції можуть виявлятися протягом декількох років (від 1 року до 15 років).

1.3. РНГА та ІФА

У непрямої гемаглютинації для виявлення антитіл в сироватці крові пацієнта використовується антигенний еритроцитарний діагностикум. Він складається з еритроцитів, що містять на своїй поверхні антигени. При позитивній реакції антитіла взаємодіють з антигенами, еритроцити склеюються і випадають на дно пробірки осадом. Негативна ж реакція проявляється осіданням еритроцитів у вигляді гудзики.

ІФА – метод якісного і кількісного виявлення специфічних антитіл або антигенів, один з найбільш широко використовуваних в наші дні. Існують кілька різновидів дослідження. Для діагностики токсоплазмозу і виявлення антитіл (імуноглобулінів – IgM, IgG) використовується твердофазний ІФА. Він полягає в наступному: в спеціальних лунках планшеток з полістиролу антиген зв’язується зі стінками. При додаванні досліджуваної середовища (як правило, сироватки пацієнта), що містить молекули специфічних антитіл, відбувається утворення комплексу.

Далі додають антіглобуліновой сироватку (проти певного імуноглобуліну людини), мічену ферментом, і субстрат для нього. Після кожного етапу відбувається відмивання незв’язаних реагентів. В результаті позитивної реакції змінюється колір субстрату, що виявляється при спектрофотометрії. Кількісний вміст специфічних антитіл, що зв’язалися з молекулами антигену, визначається за інтенсивністю забарвлення.

1.4. Про що свідчить наявність антитіл IgM та IgG?

Розшифровка результатів серологічних реакцій на токсоплазмоз вимагає уваги як з боку лікаря, так і з боку пацієнта, оскільки існує ряд нюансів, що впливають на оцінку. Слід розуміти, що не завжди виявлення антитіл проти токсоплазми означає наявність інфекції.

У процесі формування імунної відповіді організму людини на впровадження збудника інфекції лімфоцитами починається вироблення специфічних антитіл: спочатку це імуноглобуліни класу M, а через деякий час і специфічні IgG-антитіла.

Виявлення IgM сигналізує про гостру стадію токсоплазмозу. Його можна виявити в перші 10-15 днів хвороби в сироватці крові. Також відзначають збільшення титру IgG в 4 рази в парних сироватках з інтервалом в три-чотири тижні.

При виявленні IgG можна говорити про латентний період хронічного токсоплазмозу, лікування якого не потрібно, або про наявність імунної пам’яті у пацієнта про перенесеної раніше інфекції. У разі загострення хронічного токсоплазмозу спостерігають збільшення титру специфічних антитіл IgG.

Виявлення і IgG, і IgM сигналізує, як правило, про інфікування, який нещодавно трапився вперше і зовсім недавно, оскільки антитіла класу М пропадають зазвичай через 3 місяці після виникнення захворювання. Але цей період досить індивідуальний і вариабелен. Так, кілька IgM-антитіл до Toxoplasma gondii може бути знайдено через 18 місяців і більше.

Особлива увага приділяється виконанню аналізів на токсоплазмоз у вагітних жінок (на максимально ранніх термінах) або жінок, які перебувають на стадії планування вагітності. Це пов’язано з тим, що токсоплазмоз включений в групу інфекцій, що мають великий вплив на репродуктивні можливості людини, а також зростання, розвиток і здоров’я майбутніх дітей.

Група таких інфекцій іменується TORCH-комплексом (абревіатура латинських назв захворювань: Toxoplasma, Others (сифіліс, ВІЛ, гепатит В і С, вітряна віспа, хламідіоз), Rubella (краснуха), Cytomegalovirus (цитомегаловірусна інфекція), Herpes (вірус герпесу)). Зараження вперше або загострення хронічних форм цих захворювань під час вагітності може бути досить небезпечним для плода.

При виявленні у цієї групи жінок тільки IgG особливих заходів не приймається, оскільки, як уже було сказано раніше, це ознака раніше перенесеного токсоплазмозу і зустрічі зі збудником. У разі ж виявлення IgG та IgM або тільки IgM необхідно пройти додаткове обстеження за допомогою методу ПЛР, про який мова піде нижче, або провести тест на авідність IgG-антитіл для виявлення терміну давності інфікування.

Авідності називають характеристику міцності зв’язку антитіл з антигенами. IgG-антитіла спочатку недостатньо міцно пов’язані з антигенами, тобто мають низьку авідності. В процесі розвитку відповіді імунної системи лімфоцити синтезують все більше високоавідні IgG-антитіла, які мають більш міцні зв’язки з відповідними антигенами.

Таким чином, чим вище авідності, тим більше термін давності інфікування. Даний тест заснований на поділі антитіл за допомогою впливу на утворилися імунні комплекси розчином, що руйнують білок. Після такої обробки низькоавідних антитіла втрачають зв’язок з антигеном, а високоавідні – зберігають. Це відображають індексом авідності – відношенням концентрації IgG-антитіл, що залишилися пов’язаними, до їх концентрації до проведення обробки.

У таблиці 1, розташованої нижче, можна подивитися, що означають позитивні антитіла IgG і IgM і різні їх комбінації. Позитивні anti Toxoplasma gondii IgG, IgM відзначені в таблиці плюсом, негативні – мінусом.

anti Toxoplasma gondii IgG anti Toxoplasma gondii IgM ПЛР висновок
Людина не хвора токсоплазмозом і ніколи не хворів
+ Латентний період хронічного токсоплазмозу, наявність імунітету проти токсоплазмозу, додаткове проведення тесту на авідність IgG у вагітних.
+ Можлива помилка в проведенні аналізів. Повторити ІФА і ПЛР через 2 тижні.
+ + Гостра стадія первинного інфікування токсоплазмозом, перші дні
+ + + Гостра стадія токсоплазмозу
+ + Щодо недавнє одужання, такий варіант аналізів можливий від 3 до 18 місяців після одужання. Необхідно додаткове проведення тесту на авідність IgG

Таблиця 1 – Як оцінити результати серологічних реакцій на токсоплазмоз

1.5. Можливості ПЛР при токсоплазмозі

За допомогою цієї реакції виявляють ДНК збудника в крові, спинномозковій рідині або навколоплідних водах у вагітних. ПЛР полягає в багаторазовому подовженні невеликої ділянки ДНК за допомогою ферментів в штучних умовах. В результаті виходить ділянка, необхідна для дослідження і візуального підтвердження наявності збудника. Метод ПЛР добре зарекомендував себе, оскільки має велику кількість переваг перед іншими методами, специфічність його досягає 100%.

1.6. біологічна проба

При проведенні проби білим мишам внутрішньоочеревинно вводять плазму крові або спинномозкову рідину досліджуваного, тим самим заражаючи тварина в разі наявності захворювання у пацієнта. Через 5-6 днів проводять розтин миші для вивчення матеріалів органів і мазків з перитонеального ексудату (запальна рідина, яка виробляється очеревиною).

1.7. Внутрішкірна алергічна проба з токсоплазміном

Токсоплазмін – це препарат, що містить комплекс токсоплазмової антигенів, отриманих в лабораторних умовах.

Дана проба проводиться наступним чином. Пацієнту вводять 0,1 мл токсоплазмина шприцом в товщу шкіри на поверхні передпліччя, з його долоннійбоку. У людей, що мають чутливість до токсоплазміном, на місці введення алергену з’являється почервоніння та ущільнення – інфільтрат. Реакція буде вважатися позитивною, якщо через добу після введення діаметр освіти не менше 10 мм і через дві доби не зменшується.

Дана проба позитивна з четвертого тижня хвороби і може зберігатися протягом декількох років. Але це ще не означає, що досліджуваний пацієнт хворий. Позитивність проби може свідчити про колишнього зараженні і говорить про необхідність клінічних та лабораторних досліджень в динаміці. Даний метод діагностики досить специфічний.

2. Інструментальні методи діагностики

Клінічна діагностика токсоплазмозу досить скрутна у зв’язку з великим різноманіттям варіантів перебігу, форм прояву даного захворювання. Необхідно диференціювати токсоплазмоз з безліччю інших захворювань з подібними симптомами. Тільки в комплексі з іншими методами діагностики можна прийти до постановки діагнозу.

Основні симптоми токсоплазмозу: тривалий субфебрилітет (температура тіла протягом тривалого часу в межах 37 – 37,5 0С), симптоми хронічної інтоксикації, збільшення лімфатичних вузлів, ознаки ураження серцевого м’яза, збільшення печінки, селезінки, кальцифікати (скупчення кальцієвих солей) в мозку і м’язових тканинах, осередки хориоретинита (запальний процес в судинній оболонці і сітківці ока). Розрізняють декілька форм захворювання по переважному ураженню певних органів, вираженого клінічно.

Інструментальні методи діагностики проводяться за показаннями залежно від скарг пацієнта, результатів лабораторних тестів і виявлених уражень органів і тканин при об’єктивному дослідженні. Спектр їх досить великий:

  • Рентгенологічне дослідження (черепа і інших уражених органів).
  • Комп’ютерна та магнітно-резонансна томографія (головного мозку).
  • Електрокардіографія.
  • Офтальмологічні дослідження.
  • УЗД печінки, селезінки.
  • УЗД плоду в динаміці.

Діагностика токсоплазмозу, як і багатьох інших захворювань, що мають вельми різноманітні клінічні прояви, утруднена. Але, маючи в арсеналі досить велика кількість різних методів, а також знаючи епідеміологічні аспекти даного захворювання, досвідчений лікар зможе поставити правильний діагноз і прийняти відповідне рішення з приводу лікування і подальшої диспансеризації пацієнта.